注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

非洲防己堿;Columbamine CAS 3621-36-1 *  規(guī)格： 20mg

二氫醉椒苫素 ;dihydrometh CAS 19902-91-1 *  規(guī)格： 10mg

DL-丁香樹脂酚;DL-Syringar CAS 1177-14-6 *  規(guī)格： 10mg

大黃酸;Rhein CAS 478-43-3 *  規(guī)格： 20mg

次黃嘌呤;6-Hydroxypurine CAS 68-94-0 *  規(guī)格： 20mg

刺芒柄花素;Formonetin CAS 485-72-3 *  規(guī)格： 20mg

;Phenylacetic aci CAS 103-82-2 *  規(guī)格： 20mg

表兒茶素;L-Epicatechin CAS 490-46-0 *  規(guī)格： 20mg

磺胺噻唑;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 72-14-0 *  規(guī)格： 0.25g

解喹;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 99607-70-2 *  規(guī)格： 0.1g

草定;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 97886-45-8 *  規(guī)格： 0.1g

;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS  *  規(guī)格： 0.1g

硝胺;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 99-30-9 *  規(guī)格： 0.1g

蕓苔素內(nèi)酯;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 72962-43-7 *  規(guī)格： 0.1g

吡丙;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 95737-68-1 *  規(guī)格： 0.1g

腺病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家二氫尿嘧  114.1  Two hydrogen uracil*：504-07-4分子量： C4H6N2O2

4-芐-2-氯甲啡啉  225.71  4- -2- benzyl chloromethyl morpholine*：40987-25-5分子量： C12H16ClNO

乙酰丙酮鈷(II)  356.26  Cobalt (II)*：14024-48-7分子量： C15H21CoO6

3-氟-4-吡甲醛  125.1  3- -4- pyridine formaldehyde*：40273-47-0分子量： C6H4FNO

乙胺嘧  248.71  The*：58-14-0分子量： C12H13ClN4

硫代米氏酮  TMK  284.42分子量： C17H20N2S*：1226-46-6

4-氯吡氮氧物  129.55  4- chloride pyridine nitrogen oxide*：1121-76-2分子量： C5H4ClNO

3-甲-4-硝吡唑  127.1  3- methyl -4-*：5334-39-4分子量： C4H5N3O2

2,3-二氟溴  192.99  2,3- two fluorine bromine*：38573-88-5分子量： C6H3BrF2

間三聯(lián)  230.3  Between three*：33763分子量： C18H14

5-[4-(三氟甲)]-1H-四唑  214.15  5-[4- (three)]-1H- four*：2251-79-8分子量： C8H5F3N4

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。