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人視網膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫組化試劑盒實驗步驟

更新時間:2021-12-09      點擊次數:1064

人視網膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫組化試劑盒實驗步驟:


1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度


2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;


3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min;


4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第5 步封閉。


5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;


6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;


7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);


8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;


9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min;


10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);


11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;


12.加HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),


37℃濕盒中孵育30 min;


13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);


14.顯色:應用DAB 溶液(試劑F)顯色;


15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;


16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;


17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。

磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體

磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體

磷酸化腎上腺素能受體β2抗體

APS抗體

激活素受體樣激酶1抗體

激活素A受體1B抗體

磷酸化雄激素受體抗體

磷酸化A-Raf抗體

?;拾贝济擋C?抗體

脂肪細胞特異性粘附分子抗體

腺相關病毒5抗體

腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體

腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體

磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

磷酸化蛋白激酶B2抗體

磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化活化復制因子2抗體

磷酸化活化復制因子2抗體

磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體


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